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              透射熒光顯微鏡與反射熒光顯微鏡的區別及優缺點

              時間:2016-10-27      瀏覽次數:10078

              1.透射式熒光顯微鏡:激發光源是通過聚光鏡穿過標本材料來激發熒光的。常用暗視野集光器,也可用普通集光器,調節反光鏡使激發光轉射和旁射到標本上.這是比較舊式的熒光顯微鏡。其優點是低倍鏡時熒光強,而缺點是隨放大倍數增加其熒光減弱.所以對觀察較大的標本材料較好。

              2.落射式熒光顯微鏡:這是近代發展起來的新式熒光顯微鏡,與上不同處是激發光從物鏡向下落射到標本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器,它與光鈾呈45度角,激發光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發光同時進入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發光和熒光分開,殘余激發光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應產物的需要。此種熒光顯微鏡的優點是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數愈大熒光愈強。

              透射熒光顯微鏡的優點及缺點

              光源:高壓汞燈或鹵素燈。

              聚光鏡:使用暗場聚光鏡,使激發光和熒光分離出來。

              物鏡:可用任何種類的物鏡。

              標本:因為是透射觀察,薄的標本比較適合。

              優點:①由于用了暗場聚光鏡,激發光不能進入物鏡,因此容易形成暗的背景,得到良好的反差,且任何物鏡都可用于觀察。②用低倍物鏡時,比反射熒光顯微鏡更亮。

              缺點:必須正確調整聚光鏡中心和高度,否則不能獲得明亮的熒光像。由于暗視場聚光鏡焦距限制,不能使用厚的載玻片。視場照明區不能過大,否則容易使熒光標本熒光色衰褪。厚的或不透明的標本不適用。

              反射熒光顯微鏡的優點及缺點
              光源:高壓汞燈或鹵素燈。

              聚光鏡:因為物鏡作為聚光鏡,所以不需要聚光鏡。

              物鏡:所用物鏡必須能透過足夠的紫外光,而且本身不產生熒光,對數值孔徑沒有限制。

              標本:厚的標本或不透明的標本都能觀察。

              優點:①由于物鏡兼作聚光鏡,不需要很多調節。②采用柯拉照明法,可利用孔徑光闌和視場光闌的效果。③物鏡數值孔徑不受限制,在高放大倍率時,也可以獲得高分辨率的像。④厚的或不透明的標本也能觀察,厚的蓋玻片也能使用。⑤其它觀察法也能與反射熒光結合使用,特別和相差法和透射微分干涉差法相結合。⑥可以避免不必要的熒光色衰褪現象。

              缺點:在用地倍率物鏡時,像比較暗,因此必須用大數值孔徑的物鏡。濾光鏡系統必須有效地分離開激發光和熒光。

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